stomatologia dziecieca warszawa cd

Stężenie wapnia w surowicy mierzono metodą absorpcji atomowej, stężenie kreatyniny w surowicy metodą automatyczną, a także parathormon w osoczu i cykliczne AMP w moczu za pomocą opisanych wcześniej metod.5, 22, 23 Mleko matki uzyskiwano od pięciu karmiących matek, a bydlęte, pasteryzowane całe i niskotłuszczowe mleko z źródła komercyjne. Wszyscy pacjenci i zdrowi badani byli badani po tym, jak uczynili świadomą zgodę zgodnie z wytycznymi Komitetu do Spraw Badania Ludzkiego w szpitalu Yale-New Haven oraz w Komitecie Humanistycznym w West Haven Veterans Affairs Medical Center. Peptydy i antyserumy
Syntetyczny amid Tyr36-PTHRP (1 do 36), PTHRP (1 do 74), PTHRP (37 do 74) i Tyr109-PTHRP (109 do 138) wytworzono przez syntezę w fazie stałej, jak to opisano uprzednio.24 Peptydy skoniugowano do hemocyjaniny skałoczepa, zemulgowanej w adiuwancie Freunda i wstrzyknięto podskórnie królikom rasy białej nowozelandzkiej. Surowica odpornościowa R-14, pochodząca od królika immunizowanego PTHRP (1 do 74), była wystarczająco silna, że rozcieńczenie 1: 6000 pozwoliło na wykrycie PTHRP (1 do 74) za pomocą testu radioimmunologicznego w stężeniu 50 pmoli na litr. Tę surowicę stosowano w teście immunoradiometrycznym (opisanym poniżej). Surowicę odpornościową R-22, pochodzącą od królika immunizowanego Tyr109-PTHRP (109 do 138), użyto do bezpośredniego testu radioimmunologicznego (opisanego poniżej).
Oczyszczanie powinowactwa antyserum
Kolumnę immunopowinowactwa PTHRP (1 do 36) przygotowano przez sprzężenie 2 mg amidu Tyr36-PTHRP (1 do 36) z sefarozą 4B aktywowaną bromocyjanem (Pharmacia, Piscataway, NJ). Na kolumnę nałożono surowicę odpornościową R-14, a przeciwciała wiążące się z unieruchomionym PTHRP (1 do 36) eluowano chlorowodorkiem glicyny, 200 mmol na litr (pH 2,5). Eluat zawierający przeciwciała anty-PTHRP (1 do 36) został zneutralizowany, a następnie wyznakowany radioaktywnie 125I przez zmianę metody laktoperoksydazy (Enzymobeads, Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA).
Kolumnę do immunopowinowactwa PTHRP (1 do 74) przygotowano przez sprzęganie 2 mg PTHRP (1 do 74) z sefarozą 4B aktywowaną bromkiem cyjanogenu. Surowicę odpornościową R-14, która przechodziła przez opisaną powyżej kolumnę PTHRP (1 do 36), naniesiono na kolumnę PTHRP (1 do 74) i eluowano przeciwciała specyficznie wiążące się z PTHRP (1 do 74). Ponieważ przeciwciała anty-PTHRP (1 do 36) zostały uprzednio wyekstrahowane immunologicznie, te wymyte przeciwciała były głównie skierowane do C-końcowego regionu PTHRP (1 do 74) i są określane jako anty-PTHRP (37 do 74) ( Ryc. 1).
PTHRP (1 do 74) Test immunoadiometryczny
Figura 2. Figura 2. Czułość i swoistość testów na PTHRP. W Panelu A, test immunoradiometryczny dla PTHRP (1 do 74) wykazuje specyficzne wiązanie drugiego przeciwciała znakowanego radioaktywnie w funkcji stężenia syntetycznego peptydu dodawanego do normalnego osocza. W panelu B test radioimmunologiczny dla PTHRP (109 do 138) pokazuje przemieszczenie radioligandu w stosunku do stężenia syntetycznego peptydu. . Oznacza PTHRP (1 do 74), . Tyr36-PTHRP (l do 36) amidu, . Tyr109-PTHRP (109 do 138), . PTHRP (37 do 74) i . hPTH (1 do 84). Słupki oznaczają średnie . SD.
Dwufunkcyjny test immunoradiometryczny jest testem typu kanapkowego, w którym jako przeciwciało wychwytujące stosuje się oczyszczony przez powinowactwo anty-PTHRP (37 do 74) związany z fazą stałą i stosuje się znakowany radioaktywnie anty-PTHRP (l do 36). jako przeciwciało sygnałowe
[hasła pokrewne: sok trzustkowy, nozdrza tylne, hurtownia tapicerska kielce ]